需要两种抗体参与,即一抗和二抗(荧光素标记)。一抗对标本中的抗原来说起抗体的作用,但对荧光标记的二抗来说又起着抗原作用。
– 可用来检测标本中未知抗原,也可检测血清中未知抗体。
k间接免疫荧光法操作步骤
¨ 标本的处理及非特异染色的封闭同直接法;
¨ 一抗染色:
– 加未标记的特异性抗体(通常1:100稀释,用0.01MpH7.4的PBS稀释),37℃作用30min或4℃过夜。
¨ 0.01M PBST漂洗5min×3次(震荡漂洗);
k间接免疫荧光法操作步骤(续)
¨ 加荧光标记的二抗抗体,37℃湿盒避光作用30min。
¨ 0.01M PBST避光漂洗5min×3次(例如包上锡纸,在摇床上漂洗);
¨ 甘油缓冲液封片
¨ 镜检
¨ 优点:敏感性较高,比直接法高10倍左右;制备一种荧光标记抗体,可应用于多种一抗;
¨ 缺点:是参加反应的因子较多,产生非特异性染色的机会增多。
m间接免疫荧光法的注意事项
¨ 荧光染色后一般在1h内完成观察,或于4℃保存4h,时间过长 ,会使荧光减弱。
¨ 每次试验时 ,需设置以下三种对照:
– 阳性对照:阳性血清+荧光标记物
– 阴性对照:阴性血清+荧光标记物
– 荧光标记物对照:PBS+荧光标记物
m间接免疫荧光法的注意事项(续)
¨ 标本片需在操作的各个步骤中,始终保持湿润,避免干燥。
¨ 一抗和二抗应始终保持在标本片上,避免因放置不平使液体流失,从而造成非特异性荧光染色
原帖由 85505542 于 2007-4-22 08:10 PM 发表
吼吼,我们所阴盛阳衰,女人当家,也是女生占绝大多数
女生多了,这自然就热闹了![]()
哪里的衣服打折,今天的发型好看吗,谁谁变胖了变瘦了
话题多了去了![]()
当然,试验中仪器,试剂也难免有冲突
还好还好,我们 ...
原帖由 85505542 于 2007-4-23 07:46 PM 发表
前些日子,看到了一首词,今天百度了一下,是范仲淹 写的
碧云天,黄叶地。秋色连波,波上寒烟翠。山映斜阳天接水。芳草无情,更在斜阳外。
黯乡魂,追旅思。夜夜除非,好梦留人睡。明月楼高休独倚。酒入愁肠,化 ...
原帖由 85505542 于 2007-4-23 19:46 发表
前些日子,看到了一首词,今天百度了一下,是范仲淹 写的
碧云天,黄叶地。秋色连波,波上寒烟翠。山映斜阳天接水。芳草无情,更在斜阳外。
黯乡魂,追旅思。夜夜除非,好梦留人睡。明月楼高休独倚。酒入愁肠,化 ...
原帖由 85505542 于 2007-5-18 07:53 PM 发表
13天的大鼠是最可爱的样子
眼睛还没有睁开,身上是绒毛,四肢的比例超大
可是莉莉插进来一句话 \"杀过老鼠的女人就已经不是女人了\"
泪奔
杀过老鼠的女人就已经不是女人了
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