sos~~紧急求助~~关于分子生物学的问题~~

1,如何判断获得的某一真核生物CDNA序列是否为全长序列?

2,根据你掌握的知识,试述利用基因工程技术调控基因表达的主要方法


我自己的大概思路是 ：
1 扣除杂交 还有 CDNA的特性去判断,如与起始密码子和终止密码子,以及是否含有PLOYA什么的
2 RNA干扰 等

求各位兄弟姐妹帮忙解决一下~考研在即，紫雾再次谢过大家了~

[s:10] 没人会吗？？

cDNA序列的特点是3‘有polyA，5‘有ATG起始密码子。而在ＡＴＧ的上游一般还有一些序列．
有了ｃＤＮＡ在基因组水平上去找对应的ＤＮＡ序列．比对序列之间的内含子，找到减切位点．
如果是已知的基因来克隆的　ｃＤＮＡ，可以根据基因的虚列来进行基因的预测，比对你得到的ｃＤＮＡ序列．
同时还可以利用表达的蛋白序列进行比对．因为有时候基因的可变减切让预测不准，就只能通过ｃＤＮＡ的测序和蛋白的真实序列进行检测了．


调空基因表达主要是上调ｕｐ和下调ｄｏｗｎ．上调的方法根据具体的生物体不同，思路无非是增加基因的拷贝，增强转录和翻译的水平．根据具体基因的调控方式．一般的方法是使用强启动子，从而大量表达．下调可以分为两种，一种是ｋｎｏｃｋｏｕｔ，就是通过同源重组的方式把基因给去掉．但是在植物中基因重组的方式是不清楚的，所以ｋｎｏｃｋｏｕｔ多见于微生物．另一重方法是通过同源重组，在原来的基因中插入一段序列，造成基因功能的丧失．但是，有些基因功能丧失会导致胚胎期死亡，或苗期死亡的现象．动物中存在Ｃｒｅ／ｌｏｘＰ的方式，通过药物注射在某一器官中，导致特定基因的失活和功能恢复．ＲＮＡｉ是现在比较流行的方式，优点在于，虽然导致某个基因的表达水平下调，但是仍有部分功能的产生，所以可以在一定程度上回避胚胎死亡．

按题目大小,酌情回答,但知识点一定要有,思路一定要清晰,大熊的回答很有代表性.

要从基因表达调控的 不同水平上回答。。。

[s:9] 谢谢诸位了

5L  说的是从  转录调控 转录后调控  翻译调控  等..........考虑？

1,首先回顾下实验设计是否合理和操作时是否得当，否则结果没有意义
2，若gene bank中有这样的序列的话，测定CDNA序列，进行BLAST
3，假如知道原序列，和剪接的位点，可以与原序列比对
4，翻译该序列，进行原MRNA翻译的蛋白质产物的比对。

调控基因表达方法很多，从诱导表达和阻遏表达方面，也可从增强和减弱表达方面。
诱导的话，可以人工的加入诱导物，激活基因表达。如生长因子，激素等
阻遏的话，可以人工的加入阻遏物，关闭基因表达。如抑制转录因子，抗生素，RNAi沉默等
增强的话，基因重组，增加表达的单元，假如增强子，还有温度，PH，光照等物理环境对特定的基因表达也可以影响，部分与诱导有关。
减弱或不让它表达的话，衰减子系列，基因敲除，极端条件下的破坏等等

至于5楼说的那些层次，我认为不应归为调控基因表达方面，我的意思仅从基因表达水平考虑，也就是从转录前和转录方面考虑。

我同意:要从基因表达调控的 不同水平上回答!