请教一道某名校的考研生化实验设计题

泛素（Ub）降解蛋白质是通过三种酶E1,E2,E3实现的。（1）设计实验证明Ub通过共价键连接E1,E2和被降解的蛋白上，不通过共价键连接E3；（2）设计实验利用Ub纯化E1,E2,E3；（3）证明泛素降解蛋白质过程中ATP为必需

谢谢大家帮忙了!

（1）设计实验证明Ub通过共价键连接E1,E2和被降解的蛋白上，不通过共价键连接E3；
这就是考察分离共价结合与非共价结合而已，可以用细胞外体系（也可以用细胞内体系，而后破碎细胞），对于Ub与E1,E2和被降解的蛋白及E3的两两蛋白的共价或非共价体系，按分子量（事先算好）层析，收取蜂尖产物（对应好分子量，确定好具体对象），然后分别进行SDS电泳，一条带的就是两者共价结合，反之为非共价。

（2）设计实验利用Ub纯化E1,E2,E3
细胞内体系，破碎细胞按上步层析后，共价结合的用酶或化学试剂切开，共价结合的加高离子强度，而后在层析或电泳分离。也可亲和层析，Ub共价连在介质共价结合的用酶或化学试剂切开，非共价结合的加高离子强度洗脱。

（3）证明泛素降解蛋白质过程中ATP为必需
用细胞外体系，不供给ATP。或者用细胞内体系，阻断线粒体功能，等待足够长时间。

[ 本帖最后由 花仙子2008 于 2007-12-12 01:29 编辑 ]

顶一下花仙子,呵呵...谢谢你的帮助

版主们为何不回答这样的 题