一个微生物问题

从一种位置革兰氏阳性菌中分离到一种聚酮类物质，具有很强的杀伤多种革兰氏阳性菌的作用。试设计实验克隆与改物质生物合成相关的基因或基因簇。

不懂呢 还是看看

聚酮类物质不是蛋白质，但是肯定是细菌中响应的酶合成的。而且聚酮类物质疏水的，应该能够透过细胞膜，分泌到细菌体外，除非聚酮类物质非游离而结合上生物大分子。

这题就是找到这些酶的基因。观察聚酮类物质产生旺时，细菌体内哪些酶的数量多或者活性高。

这不难。如果酮类物质能够透过细胞膜分泌到细菌体外，只要分出不同的条件，将分泌聚酮类物质革兰氏阳性菌与其敏感菌一起氧，何时敏感菌挂得多，那就是分泌聚酮类物质革兰氏阳性菌产生酮类物质的时候，这时破碎细胞，用此时的细胞的蛋白质组的二维电泳图象对比分泌聚酮类物质革兰氏阳性菌不或少产生酮类物质时的细胞的蛋白质组的二维电泳图象对比，总可以找出表达量不同的蛋白质或有些蛋白质没有表达。

这样可能与分泌聚酮类物质对应的蛋白质就调出来了，再用gene knock in 或gene knock out逐个敲就能确定与分泌聚酮类物质对应的蛋白质了，对相关蛋白质测序（可用质谱），然后通过蛋白质序列反推基因序列，再用基因序列到该细菌的基因组文库钓出基因位点，还有RACE，反向PCR等钓出基因的位置和完整序列。

如果多聚酮类物质不能够透过细胞膜分泌到细菌体外，那也没有关系，不同条件破碎细胞，检测细胞内的多聚酮类物质，找到多聚酮类物质最多时的培养条件，与最少时对比蛋白质组。其余相同。

[ 本帖最后由 小裴2007 于 2008-1-4 01:40 编辑 ]

考点：
1。蛋白质组学概念和二维电泳方法；
2。基因克隆方法。
3。蛋白质与其基因的序列关系和确定方法；
4。基因敲除和敲入。

[ 本帖最后由 小裴2007 于 2008-1-4 01:41 编辑 ]

High!这样的贴为何无人理睬！